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豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測試劑盒說明書
更新時(shí)間:2021-12-13 點(diǎn)擊量:1025

豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷ELISA檢測試劑盒

英文名稱:Blocking ELISA Kit For Pseudorabies Virus gB Antibody Test Kit

【規(guī)格】

96T×2/

【用途】

檢測清、血漿中豬偽狂犬病毒gB抗體,適用于對(duì)疫苗免疫狀況評(píng)價(jià)以及感染豬的血清學(xué)診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒是用來檢測豬血清中豬偽狂犬病毒gB抗體的試劑盒。該試劑盒是用豬偽狂犬病毒抗原包被的微量反應(yīng)板利用阻斷ELISA原理來檢測豬血清中豬偽狂犬病毒抗體。用酶標(biāo)儀在雙波長(450nm,630nm)測定該反應(yīng)體系的吸光度。當(dāng)被測樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體(陽性結(jié)果)時(shí),顯色就會(huì)變淺,當(dāng)被測樣品中不含有抗豬偽狂犬病毒抗體(陰性結(jié)果)時(shí),顏色就會(huì)變深。樣本的阻斷率可以通過與陰性對(duì)照吸光度的比值來確定。

【主要組成成份】

1

抗原包被板

96T×2

2

酶標(biāo)記物

22ml

色帽

3

樣本稀釋液

50ml

透明

4

陰性對(duì)照血清

1ml

綠色帽

5

性對(duì)照血清

1ml

紅色帽

6

顯色劑

12 ml *2

色帽

7

終止液

12ml

藍(lán)色帽

8

20X濃縮洗滌液

50ml

白色帽

9

蓋板膜

2


10

說明書

1



【自備器材】

1酶標(biāo)儀雙波長450/630nm濾光片

2精確的微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul

3.水浴箱或恒溫箱

4.微量振蕩器

5.洗液吸移裝置

6.一次性頭(10ul,200ul

7.去離子水

【樣本要求】

本試劑檢測的樣本為豬血清或血漿,樣本應(yīng)無菌采集,28貯存應(yīng)不超過一周,長期應(yīng)在20以下保存。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min,可以獲得最佳結(jié)果。

2樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本和陰性、陽性對(duì)照血清作2倍稀釋(即:60μl血清加60μl樣本稀釋液),混合均勻。

3配制洗滌液將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20(即1ml濃縮洗滌液加19ml水),即可使用。注意:使用前要使結(jié)晶*溶解。

【檢驗(yàn)方法】

1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測時(shí),設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔,分別加入稀釋好的陰性、性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。

2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37溫育30分鐘。

3洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,靜置10,直接甩出,洗滌3次,最后一次洗滌后在吸水紙上拍干板內(nèi)液體。

4加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl

5. 溫育:加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜,置37溫育30分鐘。

6洗板:同步驟3

7顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,室溫37避光反應(yīng)10分鐘。

8終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。

9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測各孔OD值,試驗(yàn)成立的條件是陰性對(duì)照OD值大于1.0,陽性對(duì)照的阻斷率均大于60%,若試驗(yàn)不成立,有可能是操作失誤造成,應(yīng)重讀說明書,再操作一次。

S=樣品孔OD值,N=陰性對(duì)照孔平均OD

阻斷率=(1–S/N)×100%

若被檢樣品的阻斷率小于或等于50%,該樣品判為PRV抗體陰性。

若被檢樣品的阻斷率大于或等于60%,該樣品判為PRV抗體陽性。

若被檢樣品的阻斷率在50%~60%之間,該樣品判為可疑。

【注意事項(xiàng)】

1.本試劑盒僅供研究使用。

2.不要使用過期的試劑盒組份,不要把不同批次的組份混合使用。

3.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。

4 使用前,濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫(2025),并搖動(dòng)使沉淀溶解(最好在37水浴鍋中加熱510分鐘),然后用去離子水作20倍稀釋(例如:50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水),混勻,稀釋好的洗滌液在28可以存放7-10日。

5.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

6.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于28避光保存。

7.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

8.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

28避光保存,防止冷凍,有效期12個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見包裝袋和外包裝盒。

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