本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷
牛(Bovine)膽汁酸(BA)ELISA 檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被膽汁酸(BA)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽汁酸(BA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.
血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3.
細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘
取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.
酶標儀(450nm)
2.
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明
書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍,最終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4.
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.
所有液體組分使用前充分搖勻。
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、1、2、4、8、16μmol/L
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1.
手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ
L;
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去
洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。
6.
每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7.
每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。
結果判斷
繪制標準曲線:在 Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值,大于等于0.9900。
2.
靈敏度:最di檢測濃度小于 0.1μmol/L。
3.
特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.
重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
5.
貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6.
有效期:6 個月
免責聲明
1.
試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2.
嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。
免疫組化https://www.chem17.com/st195854/product_33402077.html
熒光定量PCR https://www.chem17.com/st195854/product_33317256.html
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