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氯丙嗪快速檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2019-06-04 點(diǎn)擊量:1722

氯丙嗪快速檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書(shū)

【測(cè)定原理】

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)尿樣和組織等樣本中的氯丙嗪,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行,樣本中的氯丙嗪和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的抗氯丙嗪抗體,通過(guò)洗滌后,用TMB底物顯色,樣品中的氯丙嗪含量與樣品的吸光度值呈反比,與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出氯丙嗪含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】   

規(guī)      格:96孔/盒

靈 敏 度: 1ppb

檢測(cè)時(shí)間: 45min

樣本檢測(cè)下限:

尿      液………………………………… 3ppb

組      織………………………………… 2ppb

飼      料  ……………………………… 1ppb

交叉反應(yīng)率:

氯丙嗪(Salbutamol )………………  100%

樣本回收率:

尿        ……………………… 85%±10%

組     織   ……………………… 85%±15%

飼     料   ……………………… 85%±15%

試劑盒組成

  • 微量測(cè)試孔:1×96孔板(12條×8孔)
  • 氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品溶液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
  • 高濃度標(biāo)準(zhǔn)品:×1瓶:(1ml/瓶) 1ppm 
  • 酶標(biāo)記物      7ml……………………… 紅色帽
  • 抗體工作液  7ml………………………… 綠色帽
  • 底物A液     7ml  ……………………  棕色帽
  • 底物B液     7ml  ……………………  黑色帽
  • 終  止  液     7ml  …………………  黃色帽
  • 2X濃縮復(fù)溶液50 ml  ……………………藍(lán)色帽
  • 20X濃縮洗滌液40 ml  …………………白色帽

 所用儀器、試劑

具備的儀器:微孔酶標(biāo)儀、氮?dú)獯蹈裳b置、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、恒溫箱、天平(感量0.01g)、刻度移液管微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl

試 劑: 乙腈、甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉

實(shí)驗(yàn)前溶液配制

配液1、30ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

配液2:1X樣本復(fù)溶液

2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1:1稀釋?zhuān)? 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水)用于樣本的復(fù)溶。

樣本前處理步驟

樣本處理前須知

處理任何樣本時(shí)都必須注意:

(1)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭

(2)實(shí)驗(yàn)前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

(a)尿樣本的處理方法

取50µl清亮尿樣直接測(cè)定(如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或離心10min,4000r/min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

由于尿液陰性樣本可能會(huì)產(chǎn)生背景干擾 (在某些情況下干擾數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)2到3之間),所以推薦標(biāo)準(zhǔn)3即0.3ppb作為尿液陽(yáng)性結(jié)果的CUT OFF判斷值。

樣本稀釋倍數(shù):1

b組織樣本(肌肉和肝臟)處理方法

稱(chēng)取均勻后的組織樣本2±0.05g ,加入6ml乙腈溶液,充分振蕩2min。4000r/min以上,15離心10min

1、 取上清液4ml,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

   肉樣本:

加入1ml 樣本的復(fù)溶混合振蕩30s,取50µl用于分析。

  肉樣本稀釋倍數(shù):1

肝臟樣本:

加入2ml正己烷振蕩溶解再加入1ml 樣本的復(fù)溶混合振蕩30s4000r/min以上,15離心5min,去上層;取50µl下層 50µl樣本的復(fù)溶勻;50µl用于分析。

      肝樣本稀釋倍數(shù):2

(c)飼料樣品的處理方法

1、 稱(chēng)1.0±0.05g研碎的飼料樣品,加入10ml甲醇,再加入5g無(wú)水硫酸鈉,放振蕩器上振蕩2min;15℃ 4000r/min以上離心10min;

2、 吸出離心后的上清液2ml,于56℃氮?dú)獯蹈桑? ml 樣本復(fù)溶溶解干燥的殘留物,再加入1mL正己烷混合30s ;15℃ 4000r/min以上離心5min

3、 50µl下層 50µl去樣本的復(fù)溶勻;50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):10

酶標(biāo)免疫分析程序  

操作步驟:

1.將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置室溫(20-25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻

2.按板架及需要取出微孔條,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。

3.編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

4.標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /,然后加酶標(biāo)記物50μl/,再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,25℃環(huán)境反應(yīng)30min。

5.取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的氣泡用干凈的槍頭破)。

6.顯色:每孔加入底物液A50µl再加B50µl,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境避光顯色15min

7.測(cè)定:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定吸光度值(OD值)。

結(jié)果判定

  結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含氯丙嗪的含量成負(fù)相關(guān).

1、粗略判定:

用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含氯丙嗪濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313,樣品2的吸光度值為1.032,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.892;1ppb為1.501;3ppb為1.175; 9ppb為0.751;27ppb為0.421; 81ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是27ppb-81ppb;樣品2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實(shí)際濃度。             

2、定量分析:

所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,即:

百分吸光度值(%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。

3、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線(xiàn):

B/B0 (%)

 

1          3           9         27        81

氯丙嗪(ppb) [µg/kg]氯丙嗪檢測(cè)試劑盒的回歸曲線(xiàn)

4、再現(xiàn)性:

%CV 

            0        1       3       9     27       81

 氯丙嗪(ppb) [µg/kg]氯丙嗪檢測(cè)試劑盒的精密度

由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度,圖2顯示出氯丙嗪檢測(cè)試劑盒的精密度情況,獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)(%CV)對(duì)相應(yīng)氯丙嗪濃度作曲線(xiàn),可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低,可以得到很好的再現(xiàn)性。

注意事項(xiàng)

  • 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫(20-25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
  • 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
  • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒,稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒反應(yīng)溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲(chǔ)存】原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2~8℃保鮮冷藏,切勿冷凍。

【有效期】有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、批號(hào)見(jiàn)外包裝。

 

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